Лабораторная диагностика передающихся половым путем заболеваний

В настоящее время известно около 40 инфекций, вызывающих воспалительные процессы мочеполовых органов, в том числе инфекции, передающиеся половым путем (ИППП).

Несмотря на многообразие инфекционных агентов, или  антигенов, клинические проявления при различных инфекциях, подобны и отличаются лишь остротой и степенью выраженности воспалительного процесса.

Для адекватной терапии ИППП важна идентификация возбудителя, правильный выбор методов лабораторной их диагностики и трактовки полученных результатов.

Существует два направления  идентификации возбудителя:

  • непосредственное обнаружение инфекционного агента, или антигена,
  • выявление антител к данному возбудителю.

Попадая в организм человека, возбудитель/антиген  заставляет его защищаться, что проявляется выработкой различных антител.

Классы антител при ИППП:

  • антитела класса М (иммуноглобулин М, IgM) – показатель острой стадии заболевания,
  • антитела класса А (IgА) – секреторный иммуноглобулин,
  • антитела класса G  (Ig G) – показатель хронической стадии, или персистенции инфекции, или «иммунологической памяти».

На разных стадиях развития инфекционного процесса образуются разные антитела.  В начале заболевания, когда появляются первые признаки болезни и присутствует антиген, антител еще в крови нет, поэтому отсутствие антител при остром процессе не означает отсутствие у пациента заболевания.

Первыми появляются антитела класса  IgМ, как маркеры острой стадии инфекции, они могут быть уже на 5-6 день после начала заболевания.

Переход из острой стадии в подострую  характеризуется появлением IgА антител, обычно это происходит 10-12 день заболевания.

О хронизации процесса свидетельствуют появившиеся не ранее,  чем 2 недели  IgG. Антитела класса IgG после перенесенной инфекции могут сохраняться месяцы, годы и даже десятилетия («иммунологическая память», «иммунологический рубец»).

Антиген и антитела могут образовывать комплексы антиген-антитело и спонтанно выводиться из организма, но при этом самоизлечение происходит редко, т.к.  при большинстве инфекций выводятся далеко не все комплексы. Клиницисту важно выбрать адекватный метод диагностики с целью обнаружения антигена или антител.

Методы лабораторной диагностики возбудителей ИППП:

  1. 1. Микроскопические:

1.1.                                 светооптические, или морфологические (цитологические), в т.ч.

–  окраска мазка 1% раствором метиленовой сини, по Грамму, по Романовскому-Гимзе;

–  исследование нативного препарата (висячая капля) – для выявления трихомонад;

–  темнопольная микроскопия – для выявления бледной трепонемы;

1.2.    флюоресцентная микроскопия;

1.3.    электронная микроскопия.

2.  Серологические:

2.1.    комплекс серологических реакций (КСР):

–  реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами;

–  реакция микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном;

2.2.    реакция иммунофлюоресценции (РИФ);

2.3.    реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ);

2.4.    иммуноферментный анализ (ИФА).

3.   Культуральные.

4.   Молекулярно-биологические:

– полимеразная цепная реакция (ПЦР)

– лигазная цепная реакция (ЛЦР).

5.   Иммунохроматографические.

Факторы, определяющие качество лабораторной диагностики ИППП:

–  уровень профессиональной подготовки врачей-лаборантов;

–  организация внешнего и внутрилабораторного контроля качества исследований;

–  соблюдение санитарно-гигиенических нормативов, установленных для различных диагностических исследований;

–  регулярность проведения метрологической поверки лабораторного оборудования;

–  контроль за  качеством диагностических сред и реагентов и их сертификации.

Кратко остановимся на характеристике каждого метода лабораторной диагностики ИППП.

1. Реакция иммунофлюоресценции основана на использовании  специфических моноклональных  антител. Результат оценивают по появлению цитоплазматических включений, окрашенных в ярко-зеленый цвет. Преимущество этого метода состоит в том, что он легко выполним. Для осуществления этого способа диагностики требуется наличие квалифицированного персонала и микроскопа, оборудованного флюоресцентным приспособлением с линзой А*40.

Недостатком метода является субъективная интерпритация  результатов, некачественные диагностические наборы, сложность обработки большого числа образцов.

Чувствительность метода колеблется в пределах 60-80 %.

2. Иммуноферментный анализ основан на взаимодействии моноклональных антител, адсорбированных на поверхности лунок полистироловых планшетов с антигеном или антителами, которые находятся в исследуемых образцах и образуют иммунные комплексы. Оценка результатов проводится с помощью иммунноферментного анализатора.

Достоинством метода является то, что он недорогой, быстр в исполнении и применим для большого количества исследуемых образцов. Чувствительность метода колеблется в пределах 80-90 %.

3. ПЦР является  одним  из  наиболее  современных  и  высокоэффективных  методов  диагностики  урогенитальных инфекций, позволяет  непосредственно  обнаруживать ДНК  инфекционного  агента  в  клиническом  материале.

ПЦР – процесс, протекающий в одной пробирке и состоящий из повторяющихся циклов амплификации (размножения, копирования) специфической последовательности молекулы ДНК с целью получения достаточно большого количества копий, которые могут быть выявлены обычными методами детекции.

Преимущества  метода  ПЦР  как  метода  диагностики  инфекционных  заболеваний: прямое  определение  наличия возбудителей. Выявление  ДНК  возбудителя  дает прямое  указание  на  присутствие  возбудителя  инфекции. Высокая специфичность метода ПЦР  обусловленна  тем, что  в  исследуемом  материале выявляется  уникальный, характерный  только  для  данного  возбудителя  фрагмент ДНК. Это  исключает  возможность  получения  ложных  результатов.

Высокая  чувствительность метода  ПЦР  позволяет  выявлять даже  единичные клетки  бактерий  или  вирусов,  дает  возможность диагностировать  несколько  возбудителей  из  одной  пробы. Возможность  диагностики  не  только  острых , но  и  латентных  инфекций. Чувствительность метода ПЦР – 85-100%.

Все перечисленные методы диагностики позволяют выявлять антиген.

Антитела определяются с помощью ИФА-диагностики (серологических методов).

Если с острой стадией более или менее все ясно, диагностика хронических состояний всегда была не простой задачей для клинициста.

Если у пациента однократно обнаружены антитела иммуноглобулин  G в высоком титре, можно ли ставить диагноз и начинать лечение? Нет, должны быть клинические проявления и желательно обнаружить еще и антиген.

Врачам-венерологам нетрудно будет провести аналогию с сифилисом, если у пациента нет клиники и положительные классические серологические реакции, сразу диагноз не ставим, а повторяем анализ крови через 7-10 дней.

При повторном высоком положительном титре анитител иммуноглобулин  G и при наличии клиники или эпидемиологии, можно ставить диагноз и начинать лечение.

Исключение составляют только те случаи, когда пациент только что лечение закончил. После лечения антитела не могут очень быстро снизиться. Для этого необходимы месяцы.

Если обнаружены антитела иммуноглобулин  G в невысоких титрах, спешить ставить диагноз инфекционного заболевания не следует. В этом случае необходимо исследование антигена, т.к. титры могут быть невысокими  в острой стадии, когда они только-только появляются.

Титры антител могут быть невысокими и при персистирующей инфекции. Нужно ли спешить с лечением в данном случае? В этом случае, предложите пациенту повторить антитела иммуноглобулин  G не ранее чем через 2-3 недели. После реактивации процесса антитела скачкообразно повышаются. Определение антигена может быть в этой стадии и невозможно. Опираться следует только на динамику антител.

В таких случаях в ИФА-анализе существует метод определения парных сывороток. Суть его состоит в том, что у одного пациента забор крови производится дважды с интервалом минимум в 2-3 недели, и исследование производится в один день на одних и тех же контролях, т.е. в одних и тех же условиях. После этого рассчитывается коэффициент, по уровню которого можно судить о том,  перенесенная ли это инфекция, реактивация, персистенция, или острая инфекция.

Существующие постоянные титры антител иммуноглобулин  G (серологические шрамы) указывают на ранее перенесенную ранее инфекцию.

Терапевтический контроль: 2-х или 3-х кратное снижение иммуноглобулинов  G указывает на успешно проведенную терапию при условии, что контроль проводится не ранее месяца после проведенного  лечения.

Т.В. Проценко, В.Г.Кузнецова

Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького

http://medicusamicus.com/

http://webhnd.com

 

Leave your comment

avatar

This site uses Akismet to reduce spam. Learn how your comment data is processed.

  Subscribe  
Notify of